无菌设备在 C/B 级 下敞口取样的风险，可能导致假阳性，更严重的后果是设备本身无菌性有问题，但在调 查时把错误地问题归结到环境上。

首先建议可以采用无菌接管技术，且该无菌接管步骤是经过验证的，一般来说可以经过 风险评估不需要做实时的背景环境监测；

其次看是否可以通过密闭管道输送，将取样动作放在 A 级的灌装区域中，在无菌环境下 进行取样。

再者建议可以包含在无菌工艺模拟中进行确认。比如在灭菌有效期末端开展 APS，以及 在前期调整装量时，将接触了管道内表面的料液一并进行培养观察，以确认整个无菌设 备的无菌情况

既然是做无菌器具存放的验证，对罐等设备用背景环境的微限是没有意义的。而在非A级环境打开取样也很难反映真实无菌水平。因此验证的技术目标就在如何在不让外部环境和罐内环境联通的情况下证明内部是长时间无菌的。

可也用间接的方法，由于这些设备应该是有之间通到A级的管道出口。因此可以在设备被灭菌后注入TSB，然后在封闭状态下放置培养。达到要验证的时限后，从在A级的管道出口放出部分样品，进行无菌检查和促生长能力验证。如果TSB确实没有染菌，就可以证明罐内是无菌的。相反，若设备在存放时被微生物侵入，那TSB肯定会长菌。

既然是无菌器具的存放时限，那标准应该就是无菌，对于方法，可以是证明密封罐的密封性，通过培养皿取样或者无菌接入培养基后，润湿表面后进行培养。

不可移动的储罐它本身是存放在哪里的，多大尺寸？B级还是A级，如果是B级，它想要达到的标准是无菌还是限度？如果是在A级条件下，那就直接取样，如果是在B级，那就按照B级，如果考虑储罐内部能否达到标准，可以通过清洁验证来或者在模拟灌装时验证。

这个ECA问答指南里面有相关的问答，类似操作。有3~4种方式。

  1、A对A，即在额外一个A级环境转递。

  2、直接培养皿（培养基先灭菌再放进去）放进去，但是要注意，培养皿不要使用呼吸袋，因为要消毒，以免造成假阴性。

  3、证明灭菌有效性后，密闭环境，直接做气密性检查即可。

两种方法：一种是在培养基模拟灌装中确认时限；另一种如果只是取样环境的话，可以看看用层流车等进行，或者使用无菌取样装置断开取样。